Acteur britannique, Sean Pertwee est le fils du comédien Jon Pertwee et s’est formé à la Bristol Old Vic Theatre School. Il a ensuite intégré la Royal Shakespeare Company durant trois ans à la fin des années 80. A l’écran, on peut le voir pour la première fois dans Prick Up Your Ears (Frears, 1987), ainsi que de nombreuses séries télévisées.
On le repère au cinéma dans un second rôle pour Hooligans (Davis, 1995). Mais c’est surtout dans l’horreur qu’il se fait un nom grâce à ses rôles marquants dans Event Horizon : Le vaisseau de l’au-delà (Anderson, 1997) et Sept jours à vivre (Niemann, 2000). Toutefois, son premier vrai rôle de premier plan lui est offert par Neil Marshall dans le film de loup-garou Dog Soldiers (2002). La même année, on le retrouve au générique d’Equilibrium (Wimmer).
Sean Pertwee multiplie les rôles avec Goal ! – Naissance d’un prodige (Cannon, 2005), Wilderness (Bassett, 2006), Goal 2 : La consécration (Collet-Serra, 2007) et Doomsday (Marshall, 2008).
Même s’il continue à jouer dans de nombreuses séries B peu connues, il est surtout très présent à la télévision avec une centaine d’épisodes de la série Gotham à son actif, dans le rôle d’Alfred Pennyworth, le majordome de Batman. Il reste fidèle à Neil Marshall en incarnant un terrible inquisiteur dans Sorcière (Marshall, 2020). Depuis, on l’a revu en majordome d’une famille de vampires dans le médiocre Le bal de l’enfer (Thompson, 2022).