Actrice américaine, June Lockhart est la fille des comédiens Gene Lockhart (1891-1957) et Kathleen Arthur (1894-1978). Elle débute enfant sur les planches, puis adolescente au cinéma, en 1938. Dans les années 40, elle tient des seconds rôles dans plusieurs films dont L’étrangère (1940) d’Anatole Litvak, Sergent York (1941) de Howard Hawks et Le chant du Missouri (1944) de Vincente Minnelli. La jeune femme est également tête d’affiche de séries B comme She-Wolf of London (1946) de Jean Yarbrough et Bury Me Dead (1947) de Bernard Vorhaus.
On la voit aussi dans Son of Lassie (1945) de S. Sylvan Simon et La brigade suicide (1948) d’Anthony Mann. En même temps, elle ne renonce pas à la scène et reçoit en 1948 le Tony Award de la révélation pour For Love or Money, qu’elle joue à Broadway. À partir des années 50, June Lockhart se tourne davantage vers la télévision.
Elle tourne tout de même pour le cinéma La chute des héros (1957) de Karl Malden et Lassie, la grande aventure (1963) de William Beaudine : dans ce film, elle tient le rôle du personnage de la mère de famille qui lui est aussi octroyé dans la version série télévisée de ce divertissement animalier (1958-64), et qui lui vaudra une nomination aux Emmy Awards. La suite de sa carrière se déroule essentiellement au petit écran, avec des séries comme Perdus dans l’espace.
Elle réapparaît toutefois au cinéma avec Butterfly (1981) de Matt Cimber, Les envahisseurs sont malgré nous (1983) de Michael Laughlin, Troll (1986) de John Carl Buechler, Un scénario en or (1989) de Christopher Guest, Sleep with Me (1994) de Rory Kelly ou Perdus dans l’espace (1998) de Stephen Hopkins. Suivent d’autres productions mineures telles que Wesley (2009) de John Jackman, Zombie Hamlet (2012) de John Mulowski et The Remake (2016) de Lynne Alana Delaney. June Lockhart est décédée le 23 octobre 2025 à l’âge de 100 ans.