Acteur tchécoslovaque, Vladimir Pucholt démarre sa carrière cinéma à l’âge de 11 ans. On peut le voir enfant dans Punta a ctyrlístek (Weiss, 1955), puis jeune homme dans Zalobnici (Novak, 1961). Mais il est surtout révélé dans L’as de pique (1964) où il interprète le rôle de l’apprenti maçon un peu décalé. Il est ensuite magnifique dans le rôle masculin principal des Amours d’une blonde (Forman, 1965). Il confirme avec Svatba jako remen (Krejcík, 1967) et s’impose dans le téléfilm allemand Malatesta (Lilienthal, 1970) face à Eddie Constantine.
Il abandonne ensuite le cinéma pour se consacrer à la médecine et notamment à la pédiatrie. Après avoir fui le bloc communiste, Vladimir Pucholt a exercé la pédiatrie au Canada pendant des années. Il revient au cinéma une unique fois dans Návrat ztraceného ráje (Jasny, 1999).
