Acteur écossais, Iain Glen est diplômé de la prestigieuse Royal Academy of Dramatic Art, ce qui lui a permis d’interpréter sur scènes des classiques de Shakespeare. Après quelques emplois à la télévision, on voit Iain Glen au cinéma dans Gorilles dans la brume (Apted, 1988) face à Sigourney Weaver, ainsi que Paris by Night (Hare, 1988) face à Charlotte Rampling. Cela lui permet d’incarner le rôle de l’explorateur Speke dans Aux sources du Nil (Rafelson, 1990). La même année, il décroche l’Ours d’argent du meilleur acteur pour sa prestation dans Silent Scream (Hayman, 1990). Après Fool’s Fortune (O’Connor, 1990) et Ferdydurke (Skolimowski, 1991), Iain Glen est surtout appelé à la télévision où il tourne de nombreux téléfilms.
Il ne revient au cinéma qu’en 2001 dans Lara Croft : Tom Raider (West) qui l’amène vers un cinéma plus populaire. Il tourne ensuite Darkness (Balaguero, 2002) et Resident Evil : Apocalypse (Witt, 2004) où il incarne pour la première fois le Dr. Isaacs. On le voit encore dans Man to Man (Wargnier, 2005), Kingdom of Heaven (Scott, 2005) où il joue le rôle de Richard Cœur de Lion, La dernière légion (Lefler, 2007), Resident Evil : Extinction (Mulcahy, 2007), La papesse Jeanne (Wortman, 2009), La dame de fer (Lloyd, 2011), Resident Evil : Rétribution (Anderson, 2012), Kick-Ass 2 (Wadlow, 2013) et Resident Evil : chapitre final (Anderson, 2016).
On notera également que Iain Glen est devenu un acteur très populaire de séries télévisées depuis 2008. Il a notamment été Jorah Mormont dans Game of Thrones pendant une cinquantaine d’épisodes. Il a aussi joué dans Jack Taylor, MI-5, Downton Abbey, Prisonners Wives, Breathless, Cleverman et Delicious.