Actrice espagnole, Margarita Lozano débute en 1953 au cinéma. Elle interprète la servante de Fernando Rey dans Viridiana (1961) de Luis Buñuel, et trouve ensuite des rôles à Cinecittà. Elle se retrouve ainsi au casting de Pour une poignée de dollars (1964) de Sergio Leone, Porcherie (1969) de Pier Paolo Pasolini et Ce merveilleux automne (1969) de Mauro Bolognini. L’actrice fait un break à la décennie suivante pour des raisons familiales.
On la retrouve, resplendissante quinquagénaire, dans La nuit de San Lorenzo (1982) et Kaos, contes siciliens (1984) des frères Taviani. Elle joue également la mère de Nanni Moretti dans son film La messe est finie (1985), une sorcière italienne dans Jean de Florette (1986) de Claude Berri, et la grand-mère dans L’autre moitié du ciel (1986) de Manuel Gutiérrez Aragón.
Elle reste fidèle aux Taviani, Vénitienne dans Good Morning Babilonia (1987), ou mère de Julian Sands dans Le soleil même la nuit (1990). L’actrice est ensuite dirigée par d’autres metteurs en scène dont Francesca Archibugi (Les yeux fermés, 1994) et Paolo Virzì, qui lui offre son dernier rôle dans Napoléon (et moi), en 2006. Margarita Lozano, par ailleurs comédienne de théâtre et de télévision, obtient en 2018 la médaille d’or du mérite des beaux-arts décernée par le ministère de la Culture espagnol. Elle est décédée le 7 février 2022 à l’âge de 90 ans.